尊龙凯时 大鼠肺泡上皮细胞L2培养手册

一、细胞培养条件

细胞名称：大鼠肺泡上皮细胞L2
生长特性：贴壁生长
冻存条件：无血清冻存液（货号：C7001）
培养体系：1640培养基 + 10% FBS + 1% 双抗
传代方法：首次建议按1:2比例传代。传代情况：每两天更换培养基。

备注：用无菌离心管收集培养基以备用，如对比培养效果不佳，建议直接选用尊龙凯时提供的完全培养基。

二、细胞处理方法

收到细胞后，将其培养至良好状态，再用完全培养液灌满并封好瓶口，以确保运输细胞的最佳状态。操作前，用75%酒精对整个细胞瓶进行消毒，然后放置于超净台内进行无菌操作。细胞瓶应放入37℃、5% CO2培养箱中静置3-4小时，以便细胞稳定后进行后续处理。观察细胞生长情况并拍照留存（建议拍摄40x、100x、200x的照片），前三天的照片将作为重要记录，若未提供照片，则默认细胞状态良好。注意，密封培养瓶放入培养箱时，应将盖子稍微松开。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

如果细胞汇合度未超过80%，收集瓶中完全培养液至离心管，并保留5ml完全培养基，放入37℃、5% CO2的孵箱继续培养。如细胞密度超过80%，可按照以下步骤进行传代：

1. 弃去培养上清，使用不含钙镁离子的PBS对细胞进行润洗1-2次。
2. 加入0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml，放于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞是否已大部分脱落，迅速切换至操作台，轻轻晃动培养瓶，添加5ml以上完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落后吸出，并将悬液转移至15ml离心管内，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，添加1-2ml完全培养基重悬细胞。
4. 按1:2比例分瓶传代（分为两个T25瓶），补充新的完全培养基至每瓶5-8ml，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞在培养瓶中生长至80%覆盖面积时，弃去培养液并用PBS清洗细胞一次。
2. 加入0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，观察细胞回缩变圆后，再加入5ml完全培养液终止消化，轻轻吹打使细胞脱落，将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀细胞后加入1ml尊龙凯时无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转移至冻存管中。
4. 将冻存细胞直接置于-80℃冰箱，若后续需转移至液氮罐，则需在-80℃中存放至少24小时后再转移。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管（佩戴防护设备），迅速将其放入37℃水浴中解冻，直至无结晶形成，然后用75%酒精擦拭冻存管外壁。
2. 将解冻的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀后用5ml完全培养基重悬，并接种至T25培养瓶，放于37℃、5% CO2培养箱中继续培养。
4. 次日，更换为新鲜的完全培养基继续加培养。

四、注意事项

部分细胞在贴壁性较差的情况下，可能在运输过程中脱落，这是正常现象。您可以按照前述方法操作，将培养液收集至离心管，进行离心和重悬。再进行细胞传代时，遵循1:2比例，并补充新的完全培养基，最后放入适宜的环境中培养。

五、售后条款

1) 若细胞出现问题，以下情况可以重发：

• 运输过程中遭遇的各类问题，如细胞丢失、瓶身破损等。
• 收到产品后48小时内提供真实实验结果的污染问题。
• 常温发货的细胞在静置24小时后或干冰运输的细胞复苏24小时存活率低于预期。
• 细胞活性问题，需在收到产品7天内提供台盼蓝染色法的检测结果。
• 在收到细胞的当天和第2、3天内拍照，若未提供，则视为产品合格。

2) 针对以下情况，不予重发：

• 客户原因造成的细胞污染或状态不良。
• 使用非本库推荐的培养体系导致的状态不良。
• 细胞状态不良且未提供前三天照片。

在细胞培养过程中，无论是操作还是环境因素，都建议使用尊龙凯时的产品，以确保细胞的健康成长与实验的成功。